Визначення ТБК – активних продуктів у плазмі крові

Визначення ТБК - активних продуктів проводили за методикою Л.І. Андреєвої 4. Рівень ТБК-активних продуктів визначали у плазмі крові. Робота по визначенню ТБК-активних продуктів проводилася за протоколом, що подано у таблиці 2.1.

Таблиця 2.1. Протокол процедури визначення ТБК- активних продуктів Реагенти Контроль Експериментальний зразок плазма або 10 % гомогенат клітин, мл ––– 1,00 1ммоль/л FeSO4•7H2O, мл 0,10 0,10 1 % ортофосфорна кислота, мл 2,00 2,00 0,6 % тіобарбітурова кислота, мл 1,00 1,00 інкубація 60 хв. при 100°С з наступним охолодженням

Вміст ТБК-активних продуктів розраховуємо за формулою:

де СМ – концентрація ТБК-активних продуктів, у мкмоль/л; Адосл – оптична щільність проби; 3 мл – об’єм водної фази; 0,1 мл – об’єм проби; 106 – коефіцієнт перерахунку з моль/л на мкмоль/л; 1,56∙105 – молярний коефіцієнт екстинкції.

2.5. Визначення ТБК – активних продуктів у еритроцитах крові

Метод заснований на утворенні забарвленого комплексу при взаємодій МДА з тібарбітуровою кислотою. Реактиви: 1. Розчин трихлороцтової кислоти (ТХО), 170г/л; 2. Розчин 2 – тіобарбітурової кислоти (ТБК), 8 г/л 3. Розчин хлориду натрію, ізотонічний, 0,15 моль/л (9г/л) Хід визначення. Для дослідження відбирають 0,1 мл еритроцитів, тричі відмитих охолодженим ізотонічним розчином, і гемолізуються внесенням у пробірку 2,0мл дистильованої води. До отриманого гемолізаті додають 1,0 мл розчину ТБК. Пробу прогрівають у киплячій водяній лазні протягом 10 хв., потім центрифугують 10 хв. при 300 об/хв. Інтенсивність забарвлення вимірюють при довжині хвилі 540 нм у кюветі з товщиною шару 1 см.

                Аоп*106*4

С(мкмоль/мл) = ___________ , де

               1,56*105*0,1

Адосл – оптична щільність проби; 4 мл – об’єм водної фази; 0,1 мл – об’єм проби; 106 – коефіцієнт перерахунку з моль/л на мкмоль/л; 1,56∙105 – молярний коефіцієнт екстинкції.