Відмінності між версіями «Визначення ТБК – активних продуктів у плазмі крові»
(Створена сторінка: Визначення ТБК - активних продуктів проводили за методикою Л.І. Андреєвої 4. Рівень Т...) |
|||
| Рядок 30: | Рядок 30: | ||
3. Розчин хлориду натрію, ізотонічний, 0,15 моль/л (9г/л) | 3. Розчин хлориду натрію, ізотонічний, 0,15 моль/л (9г/л) | ||
Хід визначення. Для дослідження відбирають 0,1 мл еритроцитів, тричі відмитих охолодженим ізотонічним розчином, і гемолізуються внесенням у пробірку 2,0мл дистильованої води. До отриманого гемолізаті додають 1,0 мл розчину ТБК. Пробу прогрівають у киплячій водяній лазні протягом 10 хв., потім центрифугують 10 хв. при 300 об/хв. Інтенсивність забарвлення вимірюють при довжині хвилі 540 нм у кюветі з товщиною шару 1 см. | Хід визначення. Для дослідження відбирають 0,1 мл еритроцитів, тричі відмитих охолодженим ізотонічним розчином, і гемолізуються внесенням у пробірку 2,0мл дистильованої води. До отриманого гемолізаті додають 1,0 мл розчину ТБК. Пробу прогрівають у киплячій водяній лазні протягом 10 хв., потім центрифугують 10 хв. при 300 об/хв. Інтенсивність забарвлення вимірюють при довжині хвилі 540 нм у кюветі з товщиною шару 1 см. | ||
| − | + | ||
| + | Аоп*106*4 | ||
С(мкмоль/мл) = ___________ , де | С(мкмоль/мл) = ___________ , де | ||
| − | + | 1,56*105*0,1 | |
Адосл – оптична щільність проби; | Адосл – оптична щільність проби; | ||
4 мл – об’єм водної фази; | 4 мл – об’єм водної фази; | ||
Поточна версія на 19:25, 14 червня 2015
Визначення ТБК - активних продуктів проводили за методикою Л.І. Андреєвої 4. Рівень ТБК-активних продуктів визначали у плазмі крові. Робота по визначенню ТБК-активних продуктів проводилася за протоколом, що подано у таблиці 2.1.
Таблиця 2.1. Протокол процедури визначення ТБК- активних продуктів Реагенти Контроль Експериментальний зразок плазма або 10 % гомогенат клітин, мл ––– 1,00 1ммоль/л FeSO4•7H2O, мл 0,10 0,10 1 % ортофосфорна кислота, мл 2,00 2,00 0,6 % тіобарбітурова кислота, мл 1,00 1,00 інкубація 60 хв. при 100°С з наступним охолодженням
Вміст ТБК-активних продуктів розраховуємо за формулою:
де СМ – концентрація ТБК-активних продуктів, у мкмоль/л; Адосл – оптична щільність проби; 3 мл – об’єм водної фази; 0,1 мл – об’єм проби; 106 – коефіцієнт перерахунку з моль/л на мкмоль/л; 1,56∙105 – молярний коефіцієнт екстинкції.
2.5. Визначення ТБК – активних продуктів у еритроцитах крові
Метод заснований на утворенні забарвленого комплексу при взаємодій МДА з тібарбітуровою кислотою. Реактиви: 1. Розчин трихлороцтової кислоти (ТХО), 170г/л; 2. Розчин 2 – тіобарбітурової кислоти (ТБК), 8 г/л 3. Розчин хлориду натрію, ізотонічний, 0,15 моль/л (9г/л) Хід визначення. Для дослідження відбирають 0,1 мл еритроцитів, тричі відмитих охолодженим ізотонічним розчином, і гемолізуються внесенням у пробірку 2,0мл дистильованої води. До отриманого гемолізаті додають 1,0 мл розчину ТБК. Пробу прогрівають у киплячій водяній лазні протягом 10 хв., потім центрифугують 10 хв. при 300 об/хв. Інтенсивність забарвлення вимірюють при довжині хвилі 540 нм у кюветі з товщиною шару 1 см.
Аоп*106*4
С(мкмоль/мл) = ___________ , де
1,56*105*0,1
Адосл – оптична щільність проби; 4 мл – об’єм водної фази; 0,1 мл – об’єм проби; 106 – коефіцієнт перерахунку з моль/л на мкмоль/л; 1,56∙105 – молярний коефіцієнт екстинкції.
